احتياطات التحليل الكهربائي للهلام البولي أكريلاميد

· بولي أكريلاميديجب أن يتكون الجل من مونومر الأكريلاميد، ومادة بدء البلمرة، والحفاز، وحق الملح وخليط المنظم معًا.

· الأكريلاميدوBIS (N, N '- ميثيلين مزدوج الأكريلاميد) هو مصفوفة هلامية من شكل المونومر.

بدء عملية بلمرة لاصق بيرسلفات الأمونيوم. يتطلب تركيب الغراء محلول بيرسلفات الأمونيوم بتركيز 10% مُحضر في الماء. أشارت معظم المعلومات إلى ضرورة الاستخدام الفعال. مع ذلك، يمكن وضع محلول بيرسلفات الأمونيوم بتركيز 10% عند درجة حرارة 4 مئوية لعدة أسابيع دون فقدان ملحوظ لفعاليته. حضّر حتى 10 مل من الغراء، ثم تخلص منه عند عدم تكتله.

نصيحة: النسبة المئويةالأكريلاميدفي تسلسل الصمغ، يختلف غراء البروتين عن غراء التسلسل. عند استخدام محلول أكريلاميد: BIS جاهز، تأكد من اختيار الزجاجة المناسبة.

تيميد (N, N, N', N'- رباعي ميثيل إيثيلين ديامين) هو عامل حفاز، يُحفظ في زجاجة بنية اللون، ويُحفظ في الثلاجة. يُضاف قبل صب الغراء مباشرةً.

يجب غسل الزجاج المُستخدم في عملية الرحلان الكهربائي للبولي أكريلاميد قبل وبعد كل مرة. بعد الرحلان الكهربائي، يُغسل بفرشاة ناعمة وقطعة قماش في ماء ساخن وصابون، ثم يُشطف بالماء المقطر ويُترك ليجف.

قد يتسبب البوليمر المجوف في رطوبة وغبار. قبل الرحلان الكهربائي، نظّف لوح الزجاج بمنظف زجاج وامسحه بفرشاة ناعمة. اغسله بالماء المقطر وجففه جيدًا بمنديل ورقي. يساعد الشطف بإيثانول بنسبة 70% قبل المسح بالورق على التنظيف وتسريع عملية التجفيف. أضف عينات من الأكريلاميد بالتتابع: BIS، الماء، المحلول المنظم، بيرسلفات الأمونيوم، TEMED. رجّ جيدًا واسكبه فورًا.

ليس من الضروري إزالة غازات بولي أكريلاميد قبل البلمرة. (كان يُوضع الأكريلاميد في فراغ لإزالة الفقاعات لأن الأكسجين يمنع البلمرة).

نصائح عينة نقطة الغراء الأفقية.

· ضع قطعة من الورق الأسود في المربع السفلي، بخلفية سوداء لعمل بعض ثقوب العينة لرؤية أكثر وضوحًا.
· خزان الغراء مملوء بالمحلول العازل، فوق المادة الغروانية مباشرة.
إذا كانت الحافة مضاءة، فأشعل الأضواء، واترك الضوء يضيء الغرواني. اسحب العينة إلى الماصة.
· استخدام جهاز التقطير الأوتوماتيكي.
في سائل ذي كثافة تتراوح بين ١٠ و٢٠٠ ميكرومتر، يُمكن استخدام نقطة الحركة في معظم نقاط العينة. أما بالنسبة لثقوب العينة الصغيرة جدًا (أقل من ١٠ ميكرومتر)، فإن رأس الماصة الطويل المُستخدم لتسلسل الغراء يكون أكثر ملاءمة.

سحب العينة بالماصة مع غمرها في العينة، واستنشاق سائل بطيء الحركة. قد تبدو العينة لزجة بسبب الجلسرين، وقد يؤدي الضخ السريع إلى دخول فقاعات الهواء إلى رأس الماصة.

بعد استنشاق العينات، سيتحرك رأس الماصة برفق على حافة الأنبوب أو باستخدام ورق المسح، مما يسحب السائل خارج القطرات. احرص على عدم امتصاص العينة.

ضع العينة في حفرة العينة

· جهاز التقطير للحفاظ على القليل من الضغط، مما يجعل العينات تتحرك قليلاً فوق رأس السائل.
يُدخل رأس الماصة في المخزن المؤقت، أعلى قليلاً من ثقوب النقاط، للحفاظ على ضغط موجب. يُمكن إدخال طرف الماصة في ثقب صغير.
أخرج العينات ببطء وثبات. ضع طرف الماصة فوق فتحة العينة النقطية، وستغوص العينة في الفتحة. دع العينة تغوص لتملأ فتحة العينة بدلاً من دفعها للداخل.
· بمجرد سقوط آخر قطرة من العينة مع رأس السائل، سيتحرك السائل إلى الساق الثانية، ارفع حركة السائل ببطء، واخرج من المخزن المؤقت

كيفية القيام بأخذ عينات الغراء العمودية؟

فتحات عينة عمودية لنقطة الالتصاق مُشكَّلة بين قطعتين من الزجاج. في غراء رقيق جدًا، لا يُمكن إدخال رأس الماصة حتى بين لوحين زجاجيين. انتبه للجلسرين! ضع رأس الماصة فوق فتحة العينة وستغوص العينة فيها.
قبل وضع العينة، تأكد من شطف فتحة العينة جيدًا. اغسل الأكريلاميد غير المُبلمر والماء الذي قد يظهر في قاع فتحة العينة. قد يُصغر الماء فتحة العينة بشكل ملحوظ. استخدم حقنة سعة 25 أو 50 مل وإبرة قياس 18. صب محلول الرحلان الكهربائي واشطف فتحة العينة جيدًا.
قد يكون من الصعب رؤية ثقب العينة، ولكن في الوقت نفسه، يسهل رؤية الباقي. في حال وجود ثقوب زائدة، يُمكن اختبار محلول العينة باستخدام أزرق البروموفينول.