احتياطات كهربائية هلام البولي أكريلاميد

· بولي أكريلاميديجب على الجل من قبل المونومر الأكريلاميد ، وبدء البلمرة ، ومحفز ، وحقيب الملح والمزيج العازلة معًا.

· الأكريلاميدو BIS (N ، N '- الميثيلين المزدوج الأكريلاميد) هو مصفوفة جل مونومر.

· persulfate الأمونيوم تبدأ عملية بلمرة لاصقة. يتطلب صياغة الغراء 10 ٪ من محلول البروتينات الأمونيوم المحضرة في الماء. أشارت معظم المعلومات إلى الحاجة إلى الاستخدام النشط. ومع ذلك ، يمكن وضع محلول 10 ٪ في 4 ℃ لعدة أسابيع دون فقدان كبير في النشاط. يشكل ما يصل إلى 10 مل وتجاهل عندما يفشل الغراء في التجميع.

نصيحة: النسبة المئويةالأكريلاميدفي تسلسل الغراء والبروتين الغراء ليس هو نفسه. إذا كنت تستخدم Acrylamide Premade: Solution ، تأكد من الحصول على الزجاجة الصحيحة.

· temed (n ، n ، n '، n'- tetramethyl ethylenediamine) هو حافز ، في زجاجة بنية ، وضعت في الثلاجة. أضف قبل صب الغراء.

· يجب غسل الكهربي البولي أكريلاميد الزجاج في الكهربائي قبل وبعد كل مرة. بعد الكهربائي ، اغسل بفرشاة ناعمة وقطعة قماش في ماء صابون ساخن ، وشطفه بالماء المقطر والوقوف حتى يجف.

· الرطوبة والغبار يمكن أن تسبب مع البوليمر المجوف. قبل electrophoresis ، قم بتنظيف الصفيحة الزجاجية مع منظف زجاجي وقم بمسحه بفرشاة ناعمة. اغسل بالماء المقطر وتجف جيدًا مع مسح الورق. يساعد الشطف بـ 70 ٪ من الإيثانول قبل المسح مع الورق على تنظيف وتسريع التجفيف. أضف عينات من الأكريلاميد على التوالي: مكرر ، الماء ، محلول عازلة ، persulfate الأمونيوم ، temed. هز جيدا وصب على الفور.

ليس من الضروري degass polyacrylamide قبل البلمرة. (اعتادت الأكريلاميد وضعها في فراغ لإزالة الفقاعات لأن الأكسجين يمنع البلمرة.)

نصائح عينة نقطة الغراء الأفقية.

· ضع قطعة من الورق الأسود في الصندوق السفلي ، خلفية سوداء لجعل بعض ثقب العينة لرؤية أكثر وضوحًا.
· خزان الغراء ممتلئ المخزن المؤقت ، فوق الغروية.
· إذا كانت الحافة تحتوي على ضوء ، فقم بتشغيل الأضواء ، فدع الضوء يضيء إلى الغرويات. ارسم العينة إلى ماصة.
· استخدام جهاز الأنابيب التلقائي.
· في 10-200 MU 1 يمكن استخدام نقطة نقل سائلة في معظم النقاط على العينة. بالنسبة لثقوب عينة صغيرة جدًا (أقل من 10μ1) ، يكون رأس ماصة طويل يستخدم لتسلسل الغراء أكثر ملاءمة.

· الأنابيب المنغمس فقط في العينة ، واستنشاق السائل المتحرك ببطء. قد تظهر العينة لزجة بالجليرين ، وقد يجذب الضخ السريع فقاعات الهواء إلى رأس ماصة.

· العينات بعد استنشاق رأس الأنابيب ، ستنقل رأس السوائل بلطف على حافة الأنبوب أو تمتص الورق الذي تمتص رأسه خارج القطرات. احرص على عدم امتصاص العينة.

ضع العينة في ثقب العينة

· جهاز pipetting للحفاظ على القليل من الضغط ، وجعل العينات تحرك قليلاً في التدفق السائل.
· رأس الأنابيب المدرج في المخزن المؤقت ، أعلى قليلاً من الثقوب الموضعية ، يحافظ على ضغط إيجابي. يمكن إدخال طرف ماصة في حفرة صغيرة.
· ببطء وثبات العينات خارج. يتم وضع طرف ماصة فوق ثقب عينة النقطة ، وستغرق العينة في الفتحة. دع العينة تغرق لملء ثقب العينة بدلاً من الدفع.
· بمجرد أن آخر قطرة من العينة برأس سائل ، سينتقل السائل إلى المحطة الثانية ، ورفع ببطء التحرك السائل ، والخروج من المخزن المؤقت

كيف تفعل أخذ عينات من الغراء العمودي؟

· فتحات عينة نقطة الغراء العمودية بين قطعتين من الزجاج. في الغراء الرفيع للغاية ، لا يمكن إدخال رأس ماصة بين لوحين زجاجيين. مشاهدة الجليسرين! ضع رأس ماصة فوق فتحة العينة وستغرق العينة في الفتحة.
· عينة النقطة من قبل ، تأكد من وضع النقطة الرأسية للبولي بروبيلين ثقب عينة هلام الأسيل تنظيف. اغسل الاكريلاميد غير المصقول والماء الذي قد يظهر في أسفل ثقب العينة. الماء يمكن أن يجعل ثقب العينة أصغر بكثير. استخدم حقنة 25 مل أو 50 مل وإبرة قياس 18. صب في العازلة الكهربائية وطرح بعناية ثقب العينة.
قد يكون من الصعب رؤية ثقب العينة ، ولكن في نفس الوقت ، يكون الباقي سهلًا. إذا كانت هناك ثقوب زائدة ، يمكن اختبار عينة المخزن المؤقت مع البروموفينول الأزرق.