· بولي أكريلاميديجب أن يكون الجل بواسطة مونومر الأكريلاميد، مادة بدء البلمرة، المحفز، وحق الملح وخليط العازلة معًا.
· مادة الأكريلاميدو BIS (N، N '- ميثيلين مزدوج الأكريلاميد) هو مصفوفة هلامية على شكل مونومر.
· كبريتات الأمونيوم تبدأ عملية بلمرة المادة اللاصقة. تتطلب صياغة الغراء محلول كبريتات الأمونيوم بنسبة 10٪ محضرًا في الماء. أشارت معظم المعلومات إلى الحاجة إلى الاستخدام النشط. ومع ذلك، يمكن وضع محلول 10% عند درجة حرارة 4 درجات مئوية لعدة أسابيع دون خسارة كبيرة في النشاط. اصنع ما يصل إلى 10 مل وتخلص منه عندما يفشل الغراء في التجميع.
نصيحة: النسبة المئويةمادة الأكريلاميدفي تسلسل الغراء والغراء البروتيني ليسا نفس الشيء. في حالة استخدام مادة الأكريلاميد الجاهزة: محلول BIS، تأكد من الحصول على الزجاجة المناسبة.
· TEMED (N, N, N', N'- رباعي ميثيل إيثيلينديامين) عبارة عن محفز، في زجاجة بنية اللون، توضع في الثلاجة. أضف قبل صب الغراء مباشرة.
· يجب غسل الزجاج المستخدم في الترحيل الكهربي متعدد الأكريلاميد قبل وبعد كل مرة. بعد الترحيل الكهربائي، اغسل بفرشاة ناعمة وقماش في الماء الساخن والصابون، ثم اشطفه بالماء المقطر واتركه حتى يجف.
· يمكن أن تسبب الرطوبة والغبار مع البوليمر المجوف. قبل إجراء التحليل الكهربائي، قم بتنظيف اللوحة الزجاجية بمنظف الزجاج وامسحها بفرشاة ناعمة. يغسل بالماء المقطر ويجفف جيداً باستخدام منديل ورقي. يساعد الشطف باستخدام 70% من الإيثانول قبل المسح بالورق على التنظيف وتسريع عملية التجفيف. إضافة عينات من مادة الأكريلاميد على التوالي: بنك التسويات الدولية، الماء، محلول عازل، فوق كبريتات الأمونيوم، تيميد. يهز جيدا ويصب على الفور.
ليس من الضروري إزالة غاز بولي أكريلاميد قبل البلمرة. (كان يتم وضع مادة الأكريلاميد في الفراغ لإزالة الفقاعات لأن الأكسجين يمنع البلمرة).
نصائح عينة نقطة الغراء الأفقية.
· ضع قطعة من الورق الأسود في المربع السفلي، وخلفية سوداء لعمل ثقب في العينة لرؤية أكثر وضوحًا.
· خزان الغراء مملوء بالمخزن العازل، فوق المادة الغروانية مباشرةً.
· إذا كانت الحافة بها ضوء، قم بتشغيل الأضواء، ودع الضوء يضيء الغرواني. ارسم العينة في الماصة.
· استخدام جهاز الماصة الآلي.
· في 10-200 مو 1 يمكن استخدام نقطة متحركة سائلة في معظم النقاط في العينة. بالنسبة لثقوب العينات الصغيرة جدًا (أقل من 10μ1)، يكون رأس الماصة الطويل المستخدم لتسلسل الغراء أكثر ملاءمة.
· سحب العينة مباشرة بعد غمسها، واستنشاق السائل الذي يتحرك ببطء. قد تبدو العينة لزجة مع الجلسرين، وقد يؤدي الضخ السريع إلى سحب فقاعات الهواء إلى رأس الماصة.
· بعد استنشاق رأس الماصة للعينات، سيحرك رأس السائل بلطف على حافة الأنبوب أو يمسح رأس السائل بورق المسح خارج القطرات. يجب الحرص على عدم امتصاص العينة.
ضع العينة في فتحة العينة
· جهاز الماصة للحفاظ على القليل من الضغط، وجعل العينات تتحرك قليلاً برأس السائل الفائض.
· يتم إدخال رأس الماصة في المخزن المؤقت، وهو أعلى قليلاً من فتحات البقعة، ويحافظ على الضغط الإيجابي. يمكن إدخال طرف الماصة في فتحة صغيرة.
· إخراج العينات ببطء وثبات. يتم وضع طرف الماصة فوق فتحة العينة النقطية، وسوف تغوص العينة في الحفرة. دع العينة تغرق لملء فتحة العينة بدلاً من دفعها للداخل.
· بمجرد آخر قطرة من العينة ذات رأس سائل، سينتقل السائل إلى الجزء الثاني، ويرفع السائل ببطء، ويتحرك خارج المخزن المؤقت
كيفية القيام بأخذ عينات الغراء العمودي؟
· تشكلت ثقوب عينة نقطة الصمغ العمودية بين قطعتين من الزجاج. في حالة الغراء الرقيق جدًا، لا يمكن حتى إدخال رأس الماصة بين لوحين زجاجيين. مشاهدة الجلسرين! ضع رأس الماصة فوق فتحة العينة وسوف تغوص العينة في الحفرة.
· نقطة العينة من قبل، تأكد من وضع نقطة عمودية من مادة البولي بروبيلين الأسيل ثقب عينة هلام يتم شطفها نظيفة. اغسل مادة الأكريلاميد غير المبلمرة والماء الذي قد يظهر في قاع فتحة العينة. يمكن أن يجعل الماء ثقب العينة أصغر بكثير. استخدم حقنة 25 مل أو 50 مل وإبرة قياس 18. صب في المخزن المؤقت الكهربائي وغسل ثقب العينة بعناية.
· قد يكون من الصعب رؤية ثقب العينة، ولكن في نفس الوقت، الباقي سهل. إذا كان هناك ثقوب زائدة، يمكن اختبار المخزن المؤقت للعينة باستخدام البروموفينول الأزرق.
وقت النشر: 31 مارس 2023